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Par : Seb
Publié : 26 mai 2009

Action de l’acide beta indole butyrique (AIB) sur les jeunes tiges de pois

Dosage biologique des auxines par le "test de pois"

Introduction

Les hormones végétales interviennent de façon importante dans les processus biologiques qui règlent la croissance et le développement des végétaux. Une méthode biologique couramment utilisée est le test de pois. Si l’on fend longitudinalement les épicotyles de pois, les 2 moitiés se courbent vers l’extérieur ; en présence d’auxine il y a stimulation préférentielle des cellules de l’épiderme, ainsi les 2 moitiés se courbent l’une vers l’autre. L’angle de courbure peut donc servir de mesure d’activité.

Cet article est plutôt destiné aux préparateurs, en effet on expliquera ici la manière de préparer des solutions d’acide beta indole butyrique à partir d’une poudre de bouturage. Quelques photos à la fin pour vous montrer les résultats que l’on peut obtenir.

Préparation de solutions d’AIB à 2 E-4 M, 1E-4M, 1E-5, 1E-6M, 1E-7M

(La notation 2E-4M signifie : deux fois dix puissance moins quatre mole par litre, c’est la notation adopté par certains tableurs...)

On trouve diverses auxines chez les fournisseurs de produits chimiques, il est donc facile de se procurer de l’acide indole butyrique (AIB) à bon marché. Le parti pris ici a été de réaliser ce test avec ce que l’on avait sous la main : à savoir une poudre de bouturage de la marque Sem (HBS) contenant de l’AIB à raison de 0.25% sur chryzotop vert.

Un sachet de 5 g d’hormone de bouturage contient donc en réalité 12.5 mg d’AIB.

- Préparation du liquide de KNOP avec lequel seront fait les dilutions :

Nitrate de Calcium : 2 g Nitrate de Potassium : 0.50 g Dihydrogénophosphate de Potassium : 0.50 g Sulfate de Magnésium : 0.50 g Sulfate ferrique : 0.002 g

Eau distillée : 2000 ml

- Préparation de la solution mère d’AIB à 2E-4M :

On sait que la masse molaire de l’AIB ( MmAIB) est de 203.2g/mol.

0.4 g de poudre de bouturage contient 1E-3 g d’AIB soit

nAIB= 1E-3 / 203.2= 4.92 E-6 mol

Donc pour un litre de KNOP contenant 2E-4M il faut :

mAIB= ((2E-4 *1E-3)/ 4.92E-6)=0.0406 g d’AIB pure

donc avec notre hormone de bouturage

mHBS= (0.0406*0.4)/0.001 = 16.26 g

Bien voila pour ce qui est des petits calcules préliminaires pour réaliser cette solution. Maintenant il faut savoir que l’AIB est très peu soluble dans l’eau, et a fortiori le chryzotop vert qui est un intrant servant de support à l’hormone. Il va donc falloir " extraire " l’AIB ; pour cela il suffit de mélanger dans un bêcher les 16.26g de poudre de bouturage à 20 ml d’éthanol à 95° non dénaturé. Homogénéisez et laissez reposer une ou deux heures ( para filmez le bêcher). Normalement, après ce lapse de temps, l’AIB est solubilisé, et le chryzotop non. Utilisez cette "bouillie " verdâtre pour réaliser la solution mère de la façon classique (fiole jaugée, qsp 1litre de KNOP). Filtrez ensuite sur papier filtre et coton afin d’obtenir une solution limpide.

(nota : la concentration de la solution n’est pas des plus précise, je vous rappelle qu’il s’agit ici de " bidouiller" et non pas de faire de la chimie de haut vol ! binettes )

- Préparation des dilutions suivantes à partir de la solution mère :

replongeons rapidement dans quelques calcules de dilution ; ici on utilisera la sacro-sainte formule suivante

Ci * Vi =Cf * Vf

(avec i pour initial [solution mère donc], et f pour final [solution fille])

Donc pour la première solution à 1E-4M, si on désire en préparer 100ml, il nous faut :

V sol mère = (Cf * Vf)/ C sol mère= (1E-4 *100)/2E-4= 50ml

On utilisera donc une fiole jaugée de 100ml dans laquelle on placera les 50ml de solution mère, puis ............ bah oui vous avez deviné : QSP à 100ml avec du liquide de KNOP.

Bon pour les autres solutions je vous donne directement les résultats (on prépare toujours 100ml de solution dans du liquide de KNOP, hein ! oubliez pas !)

1E-5M V sol mère : 5ml

1E-6M V sol mère : 0.5ml

1E-7M V sol mère : 50µl

Après le reste est expliqué ici

et ici

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Maintenant place aux photos ! binettes

Pois germés à l’obscurité :

Après 24h

Témoin KNOP :

AIB à 2E-4M :

AIB à 1E-4M :

AIB à 1E-5M :

AIB à 1E-6M :

AIB à 1E-7M :

Voila pour preuve qu’il est possible d’obtenir quelque chose de probant avec les moyens du bord !